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甲基化芯片在遗传学中的应用
2009-9-9
2655
表观遗传改变可以定义为基因的遗传性或获得性改变,但是这种改变和DNA序列改变无关。DNA甲基化是zui为常见的表观遗传改变;启动子或*外显子CpG岛中的甲基化改变将导致基因表达失活;组蛋白的化学修饰也可以作为表观遗传改变;组蛋白发生乙酰化改变的基因通常被开启。CpG岛的异常甲基化是导致基因沉默和过度表达的zui主要的改变,常规的方法不能在全基因组水平上对甲基化进行检查。表观遗传分析与基因芯片技术结合起来则可以高通量进行甲基化的定性、定量分析。目前建立了2种基于芯片的甲基化分析...
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DNA的不同提取方法及比较
2009-9-7
3641
DNA的不同提取方法及比较传统的DNA提取方法传统的DNA提取与纯化,如CTAB法、SDS法是在裂解细胞的基础上,多次苯酚氯仿等有机溶剂抽提使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的;加入RNA酶除去核酸中的RNA;然后加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70%乙醇漂洗沉淀,除去分离过程中残留的有机溶剂和盐离子,以免影响核酸溶解和抑制后续步骤的酶促反应,zui后用TE溶解DNA备用。CTAB是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,此复合物在高盐(0.7mol/...
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如何预防细胞培养的污染问题
2009-9-4
3525
体外培养的细胞受到严重污染时,有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此,防止污染,预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终,才能将发生污染的可能性降到zui小程度。一般预防可从以下几方面着手:1、从物品、用品消毒灭菌着手细胞培养所用物品清洗、消毒要*,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时,在无菌过滤操作中,随着滤过体积的增大,滤膜破损的可能性增加,故应选择zui后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作:75%的酒精搽拭培养...
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固相萃取--样品预处理的关键核心技术
2009-8-31
3495
固相萃取柱用于HPLC,GC,LC-MS/MS,GC-MS或其他技术分析样品的制备。广泛应用在药物代谢及动力学、药物分析、生物检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析等领域。固相萃取柱应用的科学原理很简单:一是让待检测的化合物通过固相萃取柱,而让杂质保留在固相萃取柱上,应用广泛的实例包括C18,PSA,NH2固相萃取柱于农残分析;另一种策略就是让杂质穿过固相萃取柱,固相萃取柱有选择性地浓缩和保留待检测的化合物。固相萃取就是一种“开、关”原理,待检测化合物要么*保留再洗脱...
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荧光定量PCR仪选择要点
2009-8-26
3974
荧光定量PCR因操作方便、运行速度快、实验结果准确,受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天,也许对你来说,zui难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算,更要详细研究各种极富诱惑力的宣传资料。面对各种不同性能的产品,您又该如何选择呢?认识荧光定量PCR的两个误区:误区一:仪器通道越多越好随着PCR技术的成熟运用,多重扩增越来越热闹,荧光定量PCR仪也不能幸免。从zu...
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抗血清的制备
2009-8-21
8631
原理:抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。一种抗原能否引起抗体生成反应,一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(Antigenicdeterminant),另一方面取决于机体的免疫状态,当具备以上两个条件后,抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。抗原的种类繁多,包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫动物具有不同的特...